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單克隆抗體技術(shù)
發(fā)布時(shí)間： 2010-08-04 點(diǎn)擊次數(shù)： 1524次利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體（McAb）基本原理是根據(jù)三個(gè)原則：（1）淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的克隆選擇學(xué)說(shuō)；（2）雜交瘤細(xì)胞保持雙方親代細(xì)胞特性化；（3）然后大量培養(yǎng)增殖，制備所需的McAb。
一、單克隆抗體的產(chǎn)生
1. 動(dòng)物體內(nèi)誘生方法：目前McAb治療用或體外診斷用的多數(shù)尚采用這一方法制備。先在小鼠腹腔注射液體石蠟或福氏不*佐劑，一周后將雜交瘤細(xì)胞懸液注射腹腔，1～2周后，無(wú)菌抽取腹水，離心取上清液即可。
2.體外培養(yǎng)法：這是實(shí)驗(yàn)室制備的方法。將雜交瘤細(xì)胞置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，待培養(yǎng)液顏色改變或細(xì)胞過(guò)多開(kāi)始死亡時(shí)，收集上清液，離心去掉碎片及細(xì)胞即可。另一種是雜交瘤細(xì)胞高密度培養(yǎng)法。
二、單克隆抗體的純化及鑒定
目前常用的純化方法有鹽析、凝膠過(guò)濾、離子交換層析和辛酸提取等方法。
單克隆抗體性質(zhì)鑒定方法如放免測(cè)定、補(bǔ)體介導(dǎo)溶血試驗(yàn)、ELISA、免疫酶、玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)等，zui常用的為ELISA方法，一般先作定性試驗(yàn)，如陽(yáng)性，進(jìn)一步作定量檢測(cè)。